大黄素甲醚是一种已经上市的植物源生物农药，可用于植物白粉病、霜霉病、灰霉病和炭疽病等植物病害的防治，该项技术开发单位曾先后荣获2014年国家科学进步二等奖和2015年中国发明专利金奖。目前，大黄素甲醚需要从中药大黄中提取，存在诸多弊端，如植物生长条件苛刻且缓慢、化合物丰度低分离难等，推高其生产成本的同时降低了工艺的经济性，严重限制了其市场推广，导致市场上难觅其踪影。

利用基因工程技术定向改造微生物合成、代谢途径积累目标中间体化学品，或者基于合成生物学理念全新设计构建新的细胞工厂高效生产植物源天然产物成为新的研究热门领域。日前，微生物制造工程中心研究人员开发了一种全新的大黄素甲醚微生物发酵生产工艺，相关成果已以“Microbial Production of the Plant-derived Fungicide Physcion”为题发表于代谢工程领域权威期刊《代谢工程》（Metabolic Engineering）上。

土曲霉中有一个地曲霉素生物合成途径，大黄素是其关键中间体化合物。为了实现大黄素甲醚的土曲霉合成，本工作首先利用过表达转录调控因子GedR成功实现了地曲霉素生物合成基因簇的激活，产生了一系列大黄素及其下游代谢衍生物；进而通过关键O-甲基转移酶基因gedA的敲除，实现了前体化合物大黄素的高效积累。在此基础上，多种策略并举挖掘大黄素-3-羟基-O-甲基转移酶，并通过体外酶活实验进行验证，最终获得了六个潜在的酶学元件；进一步通过代谢工程改造将候选酶基因导入高产大黄素的土曲霉底盘中，最终构建了大黄素甲醚高产的土曲霉细胞工厂，并进行了百升发酵放大，产量达到6.3 g/L。

图1. 大黄素甲醚生产工艺

（A）传统植物种植提取生产工艺；（B）新型合成生物技术构建微生物细胞工厂的发酵生产工艺

该项技术首次实现了植物源杀菌剂大黄素甲醚的微生物高效合成，基于现阶段技术指标，只需要一个200吨的发酵罐年产量即可覆盖我国每年种植10万亩大黄的大黄素甲醚产能，有望实现从传统植物种植提取到现代微生物发酵生产技术的变革。该项技术已经与山东鲁抗医药完成技术转让，通过共建产研合作平台推动研究成果从实验室走向工厂车间，打造大黄素甲醚微生物发酵生产新模式，降低成本、提高产能，为市场推广开发奠定基础。更值得一提的是，这是一个构建微生物细胞生产植物源天然产物的成功案例，可以为植物源天然产物的微生物发酵合成提供有效借鉴。

青岛能源所吕雪峰研究员和黄雪年研究员为本论文的共同通讯作者，副研究员齐飞飞和博士研究生张伟为论文的共同第一作者。本研究获得了国家重点研发计划、国家自然科学基金、山东省泰山学者计划及山东省重点研发计划的支持。（文/图 齐飞飞 黄雪年）

文章链接：https://doi.org/10.1016/j.ymben.2022.10.007

专利：201910649852.6  201910650149.7  2021107066086  2021107053531  2021107072392  2021107058893